用甲醇活化不应超过15秒,太长时间会对pvdf薄膜造成损坏。找到一个盘子,倒入一定体积的纯甲醇,用一把镊子将薄膜的角包裹在纯甲醇中,看到薄膜从不透明变为均匀半透明,大约需要5秒钟。然后立即将无甲醇转移溶液加入到板中,使甲醇的最终浓度为20%。可以将凝胶和膜以及滤纸转移到膜上约30分钟,并且在整个过程中将膜干燥。如果膜干燥,则需要重新激活。操作过程中注意不要划伤薄膜或弄脏薄膜,否则在显色后会有痕迹,判断干扰结果。膜的孔径也是需要考虑的问题。正常的大中等分子量蛋白质可以选择为0.45μm,但是小分子量多肽需要0.22μm膜。尼龙膜和NC膜不需要活化。
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